NY/T 3859-2021 果品中交链孢霉菌鉴定技术规程
简介
NY/T 3859-2021
果品中交链孢霉菌鉴定技术规程
Technical code of practice for identification of Alternaria Nees in fruits
2021-11-01实施
2021-05-07发布
5 原理
采用聚合酶链式反应《PCR）扩增样品中真菌核糖体基因内较水间隔区（ITS）序列，并对 PR 产物进行序列测定，将测序结果与GenBank 数据库中的相关序列进行比对，确定样品中是否存在交链孢霉菌。
6 主要试剂
6.1 DNA提取溶液（见附录A中的A.1>。
6.2 三氯甲烧-异戊醇混合液（2411）。
6.3 Tris EITA缓冲液（见附录A中的 A.2>.
6.4 PR缓冲液《见附录A中的 A.3）。
6.5 dNTPs;2.5 mmol/L._
6.6 上样缓冲液（见附录A中的 A.4）。
6.7 TAE级冲液（见附录A中的 A.5）。
6.8 DNA分子量标准;可以清楚区分100 bp~1000 bp的DNA片段。
6.9 Taug DNA 聚合酶。
6.10 琼脂糖∶电冰沌。
6.11 液氮。
6.12 无水乙.醇。
注∶除特殊注明外，本法所用试剂均为分析纯或生化试剂，水为（/T 品6应2规定的一级水。
7 设备和材料
除分子生物学实烩室常规灭菌及培养设备外.其他主要设备和材料如下∶
a）高速冷冻离心机∶最大转速≥10 000 r/min;b） 冰箱∶-20℃，2℃~4℃;
c） 天平∶感量0.01g;
d 灭菌锅∶最大压力为0.235 MPa，可调控范围溜度为105℃~135℃∶
e） 旋涡混匀器;最大转速为2800 r/min;
f PCR扩增仪∶温度范围4℃~99 ℃，挖温精度士0.25 ℃;
g）电泳仪;输出电压5V~600 V，输出电流2 mA~200 mA;
h） 凝胶或像仪;302 nm紫外透照仪、顶置自光光源、白光转换板，UV干涉滤光片、机载类像捕捉软件、图像分析软件;
i） 不锈钢小刀或眼科手术小刀;
j） 微量可调移液器∶2.5 pL、10 gL、20 nl100 μ、200 μl1 ml.∶
k）离心管∶0.2ml（PCR管）、1.5mL、2 ml。
8 鉴定步骤
NY/T 3859-2021
果品中交链孢霉菌鉴定技术规程
Technical code of practice for identification of Alternaria Nees in fruits
2021-11-01实施
2021-05-07发布
5 原理
采用聚合酶链式反应《PCR）扩增样品中真菌核糖体基因内较水间隔区（ITS）序列，并对 PR 产物进行序列测定，将测序结果与GenBank 数据库中的相关序列进行比对，确定样品中是否存在交链孢霉菌。
6 主要试剂
6.1 DNA提取溶液（见附录A中的A.1>。
6.2 三氯甲烧-异戊醇混合液（2411）。
6.3 Tris EITA缓冲液（见附录A中的 A.2>.
6.4 PR缓冲液《见附录A中的 A.3）。
6.5 dNTPs;2.5 mmol/L._
6.6 上样缓冲液（见附录A中的 A.4）。
6.7 TAE级冲液（见附录A中的 A.5）。
6.8 DNA分子量标准;可以清楚区分100 bp~1000 bp的DNA片段。
6.9 Taug DNA 聚合酶。
6.10 琼脂糖∶电冰沌。
6.11 液氮。
6.12 无水乙.醇。
注∶除特殊注明外，本法所用试剂均为分析纯或生化试剂，水为（/T 品6应2规定的一级水。
7 设备和材料
除分子生物学实烩室常规灭菌及培养设备外.其他主要设备和材料如下∶
a）高速冷冻离心机∶最大转速≥10 000 r/min;b） 冰箱∶-20℃，2℃~4℃;
c） 天平∶感量0.01g;
d 灭菌锅∶最大压力为0.235 MPa，可调控范围溜度为105℃~135℃∶
e） 旋涡混匀器;最大转速为2800 r/min;
f PCR扩增仪∶温度范围4℃~99 ℃，挖温精度士0.25 ℃;
g）电泳仪;输出电压5V~600 V，输出电流2 mA~200 mA;
h） 凝胶或像仪;302 nm紫外透照仪、顶置自光光源、白光转换板，UV干涉滤光片、机载类像捕捉软件、图像分析软件;
i） 不锈钢小刀或眼科手术小刀;
j） 微量可调移液器∶2.5 pL、10 gL、20 nl100 μ、200 μl1 ml.∶
k）离心管∶0.2ml（PCR管）、1.5mL、2 ml。
8 鉴定步骤
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